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液相色譜峰的保留時(shí)間不重現(xiàn)分為兩種情況：一是保留時(shí)間單方向的漂移，即保留時(shí)間提前或延后；二是保留時(shí)間無(wú)規(guī)律的波動(dòng)，即保留時(shí)間忽前忽后。保留時(shí)間漂移的原因大概率是不同機(jī)理的色譜柱老化，如固定相流失（例如通過(guò)水解），色譜柱污染（由樣品或流動(dòng)相所致）等。下面來(lái)逐一分析主要的影響因素及如何改善。

1、色譜柱平衡不夠。

若發(fā)生保留時(shí)間漂移，需要考慮流動(dòng)相是否已使色譜柱達(dá)到充分的平衡。一般情況下，流動(dòng)相平衡色譜柱需要10-20個(gè)柱體積；但如果流動(dòng)相中有使用弱酸、弱堿、緩沖鹽和離子對(duì)試劑，或者固定相為正相硅膠等，則需要更長(zhǎng)的時(shí)間來(lái)平衡色譜柱。

2、色譜柱污染或受損。

這時(shí)也可能會(huì)導(dǎo)致保留時(shí)間的漂移，需要同時(shí)觀察色譜峰型、柱效、壓力的變化情況，推測(cè)色譜柱是否被污染?？梢愿鶕?jù)具體的測(cè)試條件來(lái)選擇適當(dāng)?shù)娜軇┻M(jìn)行色譜柱的沖洗，或更換新的色譜柱。為了延長(zhǎng)色譜柱的使用壽命，增加保護(hù)柱是非常有效的方法。

3、柱溫改變。

確認(rèn)柱溫的準(zhǔn)確性，柱溫的變化也會(huì)導(dǎo)致保留時(shí)間的變化。

4、流動(dòng)相改變。

流動(dòng)相中某種試劑的揮發(fā)，流動(dòng)相中不同試劑的比例配制有誤，也會(huì)導(dǎo)致保留時(shí)間的變化，需要確認(rèn)流動(dòng)相是否新鮮與正確。

5、流速改變。

觀察柱前壓力，如果壓力不穩(wěn)定或者偏離正常值，可能是泵流速不準(zhǔn)確或者有氣泡產(chǎn)生，出現(xiàn)保留時(shí)間的不穩(wěn)定，需要保證儀器流速的準(zhǔn)確性與穩(wěn)定性。

6、疏水坍塌。
當(dāng)小孔徑和端基封口良好的反相色譜柱使用接近100%的水為流動(dòng)相時(shí)，有時(shí)會(huì)發(fā)生分離突然喪失、樣品保留明顯降低或完全不保留，此現(xiàn)象稱為疏水坍塌。

液相色譜峰的保留時(shí)間不重現(xiàn)的原因分析及改善方法

（一）保留時(shí)間變化    

①柱溫變化--柱恒溫    
②等度與梯度間未能充分平衡--至少用10倍柱體積的流動(dòng)相平衡柱    
③緩沖液容量不夠--用>25mmol/L的緩沖液    
④柱污染--每天沖洗柱    
⑤柱內(nèi)條件變化--穩(wěn)定進(jìn)樣條件,調(diào)節(jié)流動(dòng)相    
⑥柱快達(dá)到壽命--采用保護(hù)柱

（二）保留時(shí)間縮短
①流速增加--檢查泵,重新設(shè)定流速
②樣品超載--降低樣品量
③鍵合相流失--流動(dòng)相PH值保持在3~7.5;檢查柱的方向
④流動(dòng)相組成變化--防止流動(dòng)相蒸發(fā)或沉淀
⑤溫度增加--柱恒溫

　　
（三） 保留時(shí)間延長(zhǎng)
①流速下降--管路泄漏,更換泵密封圈,排除泵內(nèi)氣泡
②硅膠柱上活性點(diǎn)變化--用流動(dòng)相改性劑,如加三乙胺,或采用堿至鈍化柱
③鍵合相流失--流動(dòng)相PH值保持在3~7.5;檢查柱的方向
④流動(dòng)相組成變化--防止流動(dòng)相蒸發(fā)或沉淀
⑤溫度降低--柱恒溫

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